V tomto článku sa jedná sa o zistenia z novej štúdie publikovanej na Cambridge university. Originál článku publikovaný online Cambridge University Press dňa 8. apríla 2022

Ak ste si mysleli, že nezdravá strava bohatá na tuky a cukor ovplyvňuje len vašu hmotnosť, mýlili ste sa. Nový výskum opäť ukázal, že pečeň a črevá sú prepojené omnoho viac, než sme si mysleli. Nezdravý jedálniček mení prostredie vo vašom tráviacom trakte, čo môže prispievať k problémom s pečeňou.

Tuk, fruktóza a vaša pečeň

Táto štúdia skúmala vplyv hyperkalorickej diéty (bohatej na nasýtené tuky a fruktózu) na telo. Takýto typ stravy je typický pre tzv. moderný „západný“ životný štýl. Zistenia potvrdili, že tento jedálniček viedol nielen k priberaniu, ale aj k:

• Hromadeniu tuku v pečeni
• Zvýšenej úrovni látok v krvi, ktoré sú považované za pôvodcov zápalu a oslabenej funkcie pečene.

Jednoducho povedané, preťaženie pečeňou sa prejavilo na celom metabolizme.

Mikrobióm ako sprostredkovateľ

Kľúčovým zistením je, že nezdravá strava ovplyvnila zloženie črevného mikrobiómu a jeho metabolickú aktivitu:

1. Pokles rozmanitosti: U jedincov, ktorí konzumovali nezdravé jedlá dlhodobo bola zistená nižšia rôznorodosť črevných baktérií. Zdravý mikrobióm je pritom rozmanitý mikrobióm.
2. Zmena „tukových“ kyselín: Zmenili sa hladiny tzv. mastných kyselín s krátkym reťazcom (SCFA). Tieto látky, ktoré produkujú črevné baktérie, sú dôležité pre energiu a zdravie črevnej steny. Nezdravá strava viedla k nárastu niektorých vedľajších SCFA produktov, čo vedci považujú za možný sprostredkovateľ prepojenia medzi črevami a pečeňou.

Základné posolstvo? To, čo jeme, ovplyvňuje, ktoré baktérie v čreve prežijú, a tie následne ovplyvňujú metabolizmus a zdravie kľúčových orgánov, ako je pečeň.

Čo to znamená pre váš jedálniček?

Zistilo sa, že konzumácia nezdravej stravy nepoškodzuje pečeň len priamo, ale aj nepriamo, a to cez narušenie rovnováhy v črevách. Ak chcete podporiť zdravie svojej pečene a trávenie, zamerajte sa na:

• Pestrosť: Uprednostňujte celozrnné výrobky, ovocie a zeleninu, ktoré sú bohaté na vlákninu. Tieto sú „potravou“ pre prospešné baktérie.
• Obmedzenie fruktózy a nasýtených tukov: Pozor na sladené nápoje a spracované potraviny, ktoré obsahujú veľké množstvo pridaných cukrov a nezdravých tukov.
• Probiotiká: Konzumácia fermentovaných potravín (jogurty, kyslá kapusta, kefír) je skvelý spôsob, ako doplniť prospešnú mikroflóru.

Zdravé črevá sú základom – keď sú v rovnováhe, zvyšok tela funguje lepšie.

Slovenskú verziu článku nájdete nižšie. Názov článku v SK je:

Úloha mikrobiómy a mastných kyselín s krátkym reťazcom na nealkoholovú steatohepatitídu vyvolanú stravou s vysokým obsahom kalórií, nasýtených tukov a fruktózy

Iñaki Milton-Laskibar1,2 , Laura Judith Marcos-Zambrano3 , Saioa Gómez-Zorita2,4,(5) ,Enrique
Carrillo de Santa Pau(3) ,Alfredo Fernández-Quintela(2) (,) (4) (,) (5) ,Jose Alfredo Martínez(2) a
María Puy Portillo(2) (,) (4) (,) (5)
1 Program presnej výživy a kardiometabolického zdravia, IMDEA Food Institute (Madridský inštitút pre pokročilé štúdiá), Campus of
International Excellence (CEI) UAM+CSIC, Španielska národná rada pre výskum, Madrid, Španielsko
2 CIBEROBN Fyziopatológia obezity a výživy, Inštitút zdravia Carlos III (ISCIII), Madrid, Španielsko ( 3) Skupina výpočtovej
biológie, Program presnej výživy a výskumu rakoviny, Inštitút potravín IMDEA, Madrid, Španielsko ( 4) Skupina výživy a obezity,
Katedra farmácie a potravinárstva, Farmaceutická fakulta, Výskumné centrum Lucio Lascaray , Baskická univerzita (UPV/EHU),
Vitoria-Gasteiz, Španielsko 5 BIOARABA Health Research Institute, Vitoria-Gasteiz, Španielsko Korešpondenčný autor. E-mail: mariapuy.portillo@ehu.eus
I.M.-L. a L.J.M.-Z. rovnakou mierou prispeli k tejto práci.
(Prijaté 16. júna 2021; revidované 8. marca 2022; prijaté 5. apríla 2022)

ABSTRAKT
Konzumácia vysokoenergetických potravín bohatých na fruktózu a lipidy je faktorom, ktorý prispieva k
súčasnému nárastu výskytu nealkoholického steatózneho ochorenia pečene. Zmeny v zložení črevnej
mikroflóry a produkcii mastných kyselín s krátkym reťazcom (SCFA) spôsobené nezdravou stravou sa
považujú za pravdepodobné základné mechanizmy. Cieľom tejto štúdie bolo určiť vzťahy medzi zmenami v zložení črevnej mikroflóry a hladinami SCFA porovnaním potkanov s dietou vyvolanou steatohepatitídou s kontrolnými potkanmi kŕmenými štandardnou stravou. Krmivo s vysokým obsahom tukov a fruktózy (HFHF) vyvolalo zvýšenie hmotnosti tela, pečene a mezenterického tukového tkaniva, zvýšenie obsahu triglyceridov v pečeni a hladiny transamináz, glukózy, non-HDL-c a MCP-1 v sére. Po podávaní hyperkalorickej stravy bola tiež pozorovaná vyššia hladina malondialdehydu v pečeni a aktivita glutatiónperoxidázy. Pokiaľ ide o zloženie črevnej mikrobioty, u potkanov s dietou vyvolanou steatohepatitídou bola zistená znížená diverzita a zvýšený výskyt baktérií z rodov Clostridium sensu stricto 1, Blautia, Eubacterium coprostanoligenes, Flavonifractor a UBA1819, ako aj vyššie koncentrácie kyseliny izomaslovej, valerovej a izovalerovej. Tieto výsledky naznačujú, že zmeny v pečeni vyvolané hyperkalorickou stravou HFHF môžu súvisieť so zmenami v celkovom zložení črevnej mikrobioty a abundancii špecifických baktérií. Zmenu hladín SCFA vyvolanú touto nevyváženou stravou nemožno vylúčiť ako potenciálny mediátor hlásených zmien v pečeni a metabolizme.

Kľúčové slová: Nealkoholová steatohepatitída; potkan; mikrobiota; strava s vysokým obsahom tukov a fruktózy; mastné kyseliny s
krátkym reťazcom

Úvod
Obezita je chronické metabolické ochorenie charakterizované nadmerným nahromadením telesného tuku,
ktoré môže negatívne ovplyvniť zdravotný stav a dĺžku života (WHO, 2020). Prevalencia obezity sa v
posledných desaťročiach celosvetovo exponenciálne zvýšila a stala sa jednou z najrozšírenejších chronických neprenosných chorôb, ktorá by do roku 2025 mala postihnúť viac ako 1 miliardu ľudí (World obesity, 2021). Obezita vedie k rozvoju ďalších patologických stavov a morbidných prejavov, ako je cukrovka, kardiovaskulárne ochorenia, hypertenzia, určité typy rakoviny a nealkoholové ochorenie pečene (NAFLD; Blüher, 2019; Silveira et al., 2021). Obezita je v súčasnosti považovaná za jednu z hlavných príčin predčasných úmrtí vo väčšine rozvinutých krajín (Blüher, 2019).
Sedavý životný štýl a/alebo nadmerný príjem energie sú zvyčajne hlavnými faktormi, ktoré prispievajú k
rozvoju tejto multifaktoriálnej choroby. Okrem toho sa na nej podieľajú aj endogénne faktory, ako je
genetická predispozícia (hlavne polymorfizmy jedného nukleotidu) a zmenené zloženie črevnej mikroflóry
(Hwalla a Jaafar, 2021). V tejto situácii potravinový priemysel upravil zloženie širokej škály potravín a
potravinárskych výrobkov, pričom nahradil kalórie pochádzajúce z tukov ( živiny s najvyšším energetickým
výťažkom) kalóriami pochádzajúcimi z rôznych cukrov, aby znížil ich energetickú hustotu a tým aj príjem
energie spotrebiteľmi. Bohužiaľ, táto stratégia nielenže nebola účinná pri zmiernení uvedeného nárastu
prevalencie obezity, ale prispela k zvýšeniu príjmu pridaného fruktózy v strave, čo súvisí s rozvojom NAFLD (Softic et al., 2016). Keď sa fruktóza vstrebáva v čreve, väčšina tohto monosacharidu v portálnej žile vstupuje do pečene, kde sa následne metabolicky využíva ( Hannou et al., 2018). Je známe, že v pečeni fruktóza narúša metabolizmus lipidov v pečeni tým, že zvyšuje de novo lipogenézu a znižuje oxidáciu mastných kyselín v pečeni, čo môže viesť k akumulácii lipidov v pečeni ( Hannou et al., 2018). Okrem toho je potrebné poznamenať, že fruktóza môže tiež vyvolať ďalšiu dysfunkciu pečene (zápal, oxidačný stres a mitochondriálnu dysfunkciu), čím prispieva k vzniku a progresii NAFLD z relatívne benígnych stavov (pečeňová steatóza) k škodlivejším stavom (steatohepatitída, cirhóza a hepatocelulárny karcinóm; Jegatheesan a De Bandt, 2017). Je potrebné poznamenať, že vysoký príjem fruktózy je tiež známy tým, že vyvoláva inzulínovú rezistenciu pečene v dôsledku zvýšenej syntézy mastných kyselín a zníženej oxidácie (čo vedie k mitochondriálnej dysfunkcii), zvýšenej produkcii reaktívnych foriem kyslíka (ROS) a/alebo indukcii stresu endoplazmatického retikula (Softic et al., 2019; Wang et al., 2015).
Navyše, vzťah medzi fruktózou a NAFLD sa neobmedzuje len na účinky vyvolané
cukor v pečeni (Jegatheesan et al., 2016). V skutočnosti boli v štúdiách vykonaných na hlodavcoch kŕmených stravou bohatou na fruktózu zaznamenané zmeny v zložení črevnej mikroflóry a jej priepustnosti (Jegatheesan et al., 2016). V tejto súvislosti teória „viacnásobného zásahu“, ktorá sa v súčasnosti používa na opis vývoja NAFLD, považuje zmeny črevnej mikrobioty za jeden z potenciálnych mechanizmov, ktoré sú základom tohto chorobného stavu pečene (Buzzetti et al., 2016). Okrem toho zmeny vyvolané fruktózou v zložení črevnej mikrobioty môžu tiež narušiť profil metabolitov produkovaných črevnými baktériami (Buzzetti et al., 2016). Medzi nimi sa veľká pozornosť venuje mastným kyselinám s krátkym reťazcom (SCFA) kvôli ich vplyvu na energetický metabolizmus alebo imunitnú odpoveď, ako aj ich schopnosti pôsobiť ako signálne molekuly (Chakraborti, 2015). Tieto lipidové druhy sú produktom fermentácie nestráviteľných sacharidov črevnými baktériami (Aragonès et al., 2019) a keď dôjde k dysbióze črevnej mikrobioty, ich koncentrácia môže byť narušená, čo ovplyvní metabolizmus lipidov v pečeni (Alves-Bezerra a Cohen, 2017). V tomto scenári bolo cieľom tejto štúdie určiť vzťah medzi zmenami v zložení črevnej mikrobioty a hladín SCFA vyvolaných stravou s vysokým obsahom tukov a fruktózy (HFHF) u potkanov. Rovnako bola analyzovaná úloha SCFA vo vývoji steatohepatitídy.

Materiál a metódy
Zvieratá, strava a experimentálny dizajn
Táto štúdia bola vykonaná na 20 šesťtýždňových samcoch potkanov Wistar (Envigo, Barcelona, Španielsko) a všetky experimentálne postupy boli vykonané v súlade s Etickou komisiou Baskickej univerzity (referenčné číslo dokumentu CUEID CEBA/30/2010) v súlade s európskymi predpismi (Európsky dohovor – Štrasburg 1986, smernica 2003/65/ES a odporúčanie 2007/526/ES). Potkany boli umiestnené v polykarbonátových metabolických klietkach (Tecniplast Gazzada, Buguggiate, Taliansko) v klimatizovanej miestnosti (22 °C) s 12-hodinovým cyklom svetla a tmy. Po 6-dňovom adaptačnom období boli zvieratá náhodne rozdelené do dvoch skupín po desiatich zvieratách: kontrolná skupina, v ktorej boli zvieratá kŕmené štandardnou stravou (AIN-93G, OpenSource Diets, Dánsko, D10012G) a skupina HFHF, v ktorej boli zvieratá kŕmené stravou HFHF (OpenSource Diets, Dánsko, D09100301; doplnková tabuľka S1). Tieto experimentálne podmienky boli udržiavané počas 8 týždňov a zvieratá mali počas celého tohto obdobia voľný prístup k potravinám a vode. Po ukončení celého experimentálneho obdobia boli zvieratá po celonočnom pôste usmrtené v anestézii (chloralhydrát) vykrvením srdca.
Telesná hmotnosť a príjem potravy sa monitorovali denne. Vzorky stolice sa zbierali a spracovávali podľa
postupu opísaného inde (Milton-Laskibar et al., 2021). Sérum sa získalo centrifugáciou krvnej vzorky po
zrážaní (1 000 g počas 10 minút pri 4 °C). Pečeň, ako aj rôzne depozity bieleho tukového tkaniva (podkožné, epididymálne, perirenálne a mezenterické) boli pitvané, odvážené a okamžite zmrazené v tekutom dusíku. Čerstvé vzorky stolice boli odobraté na konci intervenčného obdobia, pred celonočným pôstom. Na tento účel boli zvieratá odoberané po jednom a umiestnené do čistej, samostatnej klietky, aby sa mohli odobrať vzorky stolice priamo po defekácii vyvolanej jemnou masážou brucha. Všetky vzorky boli až do analýzy uchovávané pri teplote –80 °C.

Stanovenie obsahu triacylglycerolu v pečeni a markerov v krvi
Celkové lipidy v pečeni boli extrahované podľa metódy opísanej Folchom et al. (1957), rozpustené v
izopropanole a následne merané pomocou komerčnej spektrofotometrickej súpravy (SpinReact, Girona,
Španielsko). Komerčne dostupné spektrofotometrické súpravy sa použili aj na stanovenie hladiny glukózy v sére (Biosystems, Barcelona, Španielsko), alanínaminotransferázy (ALT) a aspartátaminotransferázy (AST).
Na meranie hladiny monocytového chemoatraktantného proteínu-1 (MCP-1; Abyntek, Derio, Španielsko) v sére sa použila súprava na enzýmovo viazaný imunosorbentový test.

Markery oxidatívneho stresu v pečeni
Na analýzu peroxidácie lipidov v lyzátoch pečene potkanov bola použitá komerčná súprava na stanovenie
látok reagujúcich s kyselinou tiobarbiturovou (TBARS) (Cayman Chemical¸ Ann Arbor, MI, USA).
Malondialdehyd (MDA) a adukt TBARS vznikajúci ich reakciou v kyslom prostredí bol meraný pomocou
čítačky platní Infinite 200Pro (Tecan, Männedorf, Zürich, Švajčiarsko). Získané výsledky boli vyjadrené v μg
MDA/mg tkaniva.
Aktivita katalázy (CAT) bola študovaná podľa popisu v inej publikácii (Gómez-Zorita et al., 2020) podľa
metódy opísanej Aebim (1984), meraním spektrofotometrického zmiznutia H2 O2 pri vlnovej dĺžke 240 nm. Aktivita katalázy bola vyjadrená ako nmol/min/μg bielkoviny. Aktivita glutatiónperoxidázy (GPx) bola
meraná spektrofotometricky v pečeňových lýzatoch pomocou komerčnej súpravy (Biovision, Milpitas, CA,
USA) a podľa pokynov výrobcu v čítačke platní Infinite 200Pro. Výsledky boli vyjadrené ako GPx U/mg
bielkovín.

Analýza SCFA
Vzorky stolice (asi 30 mg stolice) sa priamo odvážili do 1,5 ml LoBind Eppendorfovej skúmavky a zmiešali s 10μl zmesi vnútorného štandardu (BA-LAB, PA-LAB a AA-LAB) a 990 μl zmesi metanolu a vody (50:50). Vzorky sa 5 minút premiešavali vortexom a centrifugovali ( 5 minút, 15 000 ot/min pri 4 °C). Objem 80 μl
supernatantu sa zmiešal s 10 μl BHA 0,1 M a 10 μl EDC 0,25 M. Potom sa vzorky premiešali vortexom a
inkubovali pri izbovej teplote 1 hodinu v tme. Po inkubácii bol fekálny extrakt zriedený 20-násobne v 50
percentnom vodnom roztoku MeOH. 200 μl zriedeného vzorku bolo extrahovaných 600 μl dietyléterom a 10 minútami intenzívneho pretrepávania. Potom boli vzorky odstredené (5 minút, 15 000 ot/min pri 4 °C) a 40 μl hornej organickej vrstvy bolo prenesené a odparené do sucha pomocou sušičky StarlettePlus-E (SPE). Zvyšok sa rekonštituoval v 200 μl 50-percentného vodného roztoku MeOH, krátko sa premiešal a centrifugoval (5 minút, 15 000 ot/min pri 4 °C) pred 1-μl injekciou do LC-MS/MS (Zeng a Cao, 2018).
Chromatografická separácia sa vykonala s gradientom, ktorý bol 0,1 % kyselina mravčia vo vode s 10 mM
mravčan amónny pre mobilnú fázu A a 0,1 % kyselina mravčia v metanole:izopropanole (9:1 v/v) pre
mobilnú fázu B. Teplota kolóny bola nastavená na 45 °C a objem injekcie bol 1 μl. Parametre zdroja boli
optimalizované pri prevádzke s pozitívnou elektrosprejovou ionizáciou, aby sa dosiahla maximálna odozva. Validácia analytickej metodiky bola vykonaná analýzou súboru vzoriek stolice štandardným pridaním s použitím vyššie uvedených interných štandardov. Stanovenými parametrami kvality boli linearita, limit detekcie (MLD), limit kvantifikácie (MQL) a intradenná aj interdenná presnosť (opakovatelnosť a stredná presnosť).

Extrakcia fekálnej DNA a amplifikácia génu 16S rRNA na analýzu zloženia mikrobioty
Extrakcia DNA bola vykonaná na čerstvých vzorkách stolice odobratých na konci intervenčného
obdobia pomocou QIAamp DNA stool MiniKit podľa pokynov výrobcu (QIAGEN, Hilden, Nemecko).
Variabilné oblasti V3 a V4 bakteriálneho génu 16S ribozomálnej RNA (16S rRNA) boli
amplifikované z fekálnej DNA a sekvenované pomocou platformy Illumina MiSeq (2 × 300). Stručne povedané, príprava amplikónov bola vykonaná pomocou protokolu 16S Metagenomic Sequencing Library Preparation Protocol (Illumina, San Diego, CA, USA), ktorý zahŕňa prečnievajúce adaptérne sekvencie pre kompatibilitu s indexom Illumina a sekvenčnými adaptérmi. Veľkosť amplikónov bola následne overená
elektroforézou (LabChip GX; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Knižnice DNA pre sekvenovanie amplikónov 16S rRNA boli pripravené pomocou Nextera XT DNA Library Preparation Kit (Nextera XT; Illumina) podľa pokynov výrobcu.
Údaje o sekvencii génu 16S rRNA boli spracované pomocou programu Quantitative Insights Into
Microbial Ecology (QIIME 2; Bolyen et al., 2019). Nízko kvalitné čítania boli filtrované a chimérické
sekvencie boli následne odstránené. Čisté čítania boli zoskupené ako varianty sekvencie amplikónu (ASV)
pomocou DADA2 (Callahan et al., 2016) a anotované pomocou referenčnej databázy génu 16S rRNA SILVA v.132 (Quast et al., 2013). Relatívna abundancia každého ASV a alfa diverzita (indexy Shannon, Chao a Simpson) boli vypočítané pomocou balíka phyloseq R (McMurdie a Holmes, 2013). Na výpočet beta-diverzity boli použité vážené UniFrac vzdialenosti, ktoré boli následne vizualizované pomocou analýzy hlavných koordinát (PCoA). Štatistická významnosť bola stanovená pomocou permutačnej multivariačnej analýzy rozptylu (PERMANOVA) s 999 náhodnými permutáciami pomocou funkcie adonis z balíka vegan R (verzia 2.5.7; Dixon, 2003). Vykonali sme lineárnu diskriminačnú analýzu efektu (LEfSe) s cieľom identifikovať bakteriálne taxóny, ktoré sú diferencovane obohatené v rôznych bakteriálnych komunitách, a stanoviť mikrobiálne biomarkery (Segata et al., 2011).

Štatistická analýza
Popisné výsledky sú prezentované ako priemerná SEM. Štatistické analýzy boli vykonané pomocou SPSS 24.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). V súčasnej analýze boli všetky premenné, s výnimkou premenných mikrobiómu, normálne distribuované podľa Shapiro-Wilksovho testu. Dáta boli testované nezávislým Studentovým testom, pričom hodnoty p < 0,05 boli považované za štatisticky významné. V prípade rozdielov v abundancii taxónov bola štatistická analýza vykonaná pomocou Kruskalovho-Wallisovho testu. Významnosť bola tiež stanovená na úrovni p < 0,05. Korelácie medzi diferencovane obohatenými bakteriálnymi taxónmi a študovanými SCFA, fenotypovými a zápalovými parametrami boli odhadnuté Spearmanovou metódou, s použitím mikrobiómu, balík v R (dostupný na https://microbiome.github.io/tutorials/; prístup 28. mája 2021). hodnotená ako koeficient ≥ 0,2 a FDR ≤ 0,05.

Výsledky
Telesná hmotnosť, hmotnosť pečene, hmotnosť tukového tkaniva, obsah triacylglycerolu v pečeni a sérové parametre
Ako je znázornené na obrázku 1A, telesná hmotnosť zvierat kŕmených stravou HFHF bola od druhého týždňa štúdie výrazne vyššia ako telesná hmotnosť zvierat v kontrolnej skupine a zostala taká až do konca
experimentálneho obdobia (8. týždeň). U zvierat v skupine HFHF bola v porovnaní so zvieratami v
kontrolnej skupine zaznamenaná aj vyššia hmotnosť pečene (obrázok 1B). Rovnaký vzorec bol zaznamenaný aj v prípade obsahu triacylglycerolu v pečeni, kde hodnoty v skupine HFHF boli výrazne vyššie ako v kontrolnej skupine (tabuľka 1). Pokiaľ ide o hmotnosť rôznych tukových zásob, výrazné rozdiely boli zaznamenané len v prípade mezenterického tukového tkaniva. V tomto prípade boli hodnoty pozorované v skupine HFHF výrazne vyššie ako hodnoty zistené v kontrolnej skupine (obrázok 1C). Na druhej strane, medzi oboma skupinami neboli zistené žiadne významné zmeny, pokiaľ ide o viscerálne tukové tkanivo ani celkovú hmotnosť tukového tkaniva, hoci v oboch prípadoch boli zistené štatisticky nevýznamné trendy (p <0,1) smerom k zvýšenej hmotnosti v skupine HFHF.
Pokiaľ ide o sérové parametre, hladina glukózy v sére nalačno pozorovaná u zvierat zo skupiny HFHF bola
výrazne vyššia v porovnaní s hladinou zistenou v kontrolnej skupine (tabuľka 1). Hladina cholesterolu v sére, ktorý nie je lipoproteínom s vysokou hustotou (non-HDL-c), ktorá bola vypočítaná odpočítaním hladiny cholesterolu v sére, ktorý je lipoproteínom s vysokou hustotou (HDL-c), od celkovej hladiny cholesterolu v sére, bola v skupine HFHF výrazne zvýšená v porovnaní s kontrolnou skupinou. Nakoniec, analýza hladín MCP-1 v sére

odhalilo, že tento parameter bol v skupine HFHF v porovnaní s kontrolnou skupinou výrazne zvýšený
(tabuľka 1).

Markery oxidačného stresu v pečeni
Analýza oxidatívneho stresu pečene odhalila, že množstvo MDA zistené v pečeňových vzorkách zvierat v
skupine HFHF bolo výrazne vyššie ako množstvo zistené u zvierat v kontrolnej skupine (tabuľka 1). Okrem
toho, hoci medzi oboma skupinami neboli pozorované žiadne zmeny v aktivite CAT, v pečeni zvierat v
skupine HFHF bola pozorovaná vyššia aktivácia GPx v porovnaní so zvieratami v kontrolnej skupine (tabuľka 1).

Analýza SCFA
Zo všetkých študovaných SCFA boli zistené významné rozdiely v koncentráciách kyseliny izomaslovej,
izovalerovej a valerovej, ktorých koncentrácie v stolici boli v skupine HFHF významne vyššie v porovnaní s
kontrolnou skupinou (tabuľka 2).

Zmeny v zložení mikrobioty vyvolané stravou
Aby sme pochopili základné mechanizmy, ktorými strava HFHF prispievala k poškodeniu pečene, skúmali sme vplyv stravovacích stratégií na zloženie črevnej mikrobioty. Podľa merania β-diverzity bol medzi oboma experimentálnymi skupinami zaznamenaný významný rozdiel v celkovom zložení mikrobiómy (p < 0,001, PERMANOVA). Obrázok 2 znázorňuje PCoA s použitím váženej matice vzdialenosti UniFrac. Mikrobióma skupiny HFHF bola jasne oddelená od mikrobiómy kontrolnej skupiny.
V skupine HFHF bol pozorovaný významný pokles alfa diverzity, ako ukazuje index Chao1 (C = 73,2 a
HFHF = 57,2; p < 0,01; obrázok 3A). Okrem celkového mikrobiálneho zloženia bola črevná mikrobiota
hodnotená na rôznych úrovniach s cieľom stanoviť rozdiely v abundancii mikrobiálnej taxónov podľa oboch stravovacích skupín a vybrať tie baktérie, ktoré môžu predstavovať potenciálne mikrobiálne biomarkery každého stavu, vykonaním analýzy LEfSe (obrázok 3B,C). V prípade zvierat v kontrolnej skupine boli najpočetnejšie baktérie z triedy Clostridia, radu

Clostridiales, čeľaď Ruminococcaceae (najmä rody Ruminiclostridium 9, Ruminococacceae UCG 005 a
Ruminococacceae UCG 014), ako aj baktérie z triedy Clostridia (rody Lachnospiraceae UCG 004 a Coprococcus 3) a kmeňa Tenericutes (rody Anaeroplasma a Mollicutes RF39). Pre túto skupinu bol charakteristický aj ďalší rod menej popísaných baktérií (tj. Muribaculaceae nekultivované a Lachnospiraceae UCG 004). Pokiaľ ide o potkany kŕmené stravou HFHF (skupina HFHF), najpočetnejšie boli baktérie z kmeňa Firmicutes, triedy Bacilli (najmä rod Lactococcus), ako aj baktérie z triedy Clostridia, najmä rody Clostridium sensu stricto 1, Blautia, skupiny Eubacterium coprostanoligenes, Flavonifractor a necharakterizovaného rodu UBA1819.

Zaujímavé je, že tieto zmeny zistené v skupine HFHF nastali napriek tomu, že na úrovni triedy (Clostridia) a
radu (Clostridiales) bola relatívna hojnosť v kontrolnej skupine väčšia (obrázok 3C). Okrem toho boli baktérie z triedy Erysipelotrichia (najmä rod Fecalitalea) tiež nadmerne zastúpené u zvierat zo skupiny HFHF. Bola vykonaná korelačná analýza s cieľom nájsť súvislosť medzi pozorovanými mikrobiálnymi
biomarkermi a zmenami zaznamenanými vo fenotypových a biochemických parametroch, abundanciou
SCFA a markermi oxidatívneho stresu v pečeni. Zistila sa negatívna korelácia medzi baktériami obohatenými v kontrolnej skupine kŕmenou štandardnou stravou ( Ruminococcaceae UCG 005, Ruminococcaceae UCG 014 a Ruminiclostridium 9) a hmotnosťou pečene, transaminázou (ALT) a hladinami non-HDL-c. Na druhej strane, baktérie nájdené v skupine HFHF (Clostridium sensu stricto 1, Clostridiaceae 1) korelovali pozitívne s hmotnosťou pečene, non-HDL-c a GPx (tabuľka 3 a doplnkový obrázok S1).

Diskusia
Celosvetový nárast prevalencie NAFLD premenil toto morbídne ochorenie pečene na globálny zdravotný
problém, ktorý sa stal najčastejšou pečeňovou poruchou nielen u dospelých, ale aj u detí.

(DiStefano a Shaibi, 2021; Masarone et al., 2014). NAFLD zahŕňa široké spektrum zmien v pečeni, od
relatívne benígnej steatózy až po závažnejšie stavy, ako je cirhóza alebo hepatocelulárny karcinóm (Engin,
2017). Okrem nadmerného hromadenia lipidov v pečeni sa na progresi poškodenia pečene podieľajú aj javy ako oxidačný stres, zápal a fibróza (Brunt et al., 2015). Vysoký príjem tukov, bežný znak „západnej stravy“, sa považuje za jeden z faktorov, ktoré spúšťajú rozvoj NAFLD. V tejto súvislosti môže nadmerný príjem tukov v strave (najmä nasýtených tukov) zmeniť metabolizmus lipidov v pečeni, narušiť rovnováhu medzi „príjmom“ lipidov v pečeni (príjem mastných kyselín v plazme a de novo lipogenéza) a „výdajom“ (oxidácia mastných kyselín v mitochondriách a uvoľňovanie lipoproteínov s veľmi nízkou hustotou), čo vedie k nadmernému hromadeniu lipidov v pečeni (Lian et al., 2020). Okrem toho sa veľká pozornosť venuje aj príjmu pridaného fruktózy ako ďalšiemu faktoru vedúcemu k rozvoju NAFLD. Spotreba tohto cukru sa v posledných desaťročiach zvýšila súbežne s rozšírením NAFLD (DiStefano a Shaibi, 2021). Nadmerná konzumácia fruktózy môže nielen zvýšiť akumuláciu lipidov v pečeni, ale aj spôsobiť zápal a fibrózu pečene, čo vedie k rozvoju nealkoholovej steatohepatitídy (Jegatheesan a De Bandt, 2017).
V súlade s týmito skutočnosťami v tejto štúdii potkany kŕmené stravou HFHF vykazovali zvýšenú
hmotnosť pečene a obsah triglyceridov, čo bolo sprevádzané zvýšením hladín sérových transamináz (ALT a AST), ktoré sa bežne používajú ako markery poškodenia funkcie pečene (Sattar et al., 2014). Okrem toho sa u týchto zvierat zistili aj zmeny v glykemickej kontrole (vyššia hladina glukózy nalačno) a dyslipidémia (vyššie hladiny non-HDL-c). Tieto pozorovania sú v súlade s dostupnou vedeckou literatúrou, kde sú opísané zmeny v metabolizme glukózy a lipidov spôsobené fruktózou (Softic et al., 2020; Stanhope et al., 2015). Okrem toho zvýšený obsah MDA v pečeni u potkanov kŕmených stravou HFHF naznačuje, že u týchto zvierat došlo k väčšej produkcii ROS, čo zase viedlo k vyššej peroxidácii lipidov. Navyše zvýšená aktivita GPx u tých istých potkanov poukazuje na vyššiu antioxidačnú odpoveď, pravdepodobne ako pokus zvrátiť oxidačné poškodenie spôsobené stravou HFHF. Okrem toho sa dalo očakávať, že skupina HFHF bude mať vyššie hladiny MCP-1 v krvi, keďže účasť tohto cytokínu na progresi poškodenia pečene bola už skôr popísaná (Glass et al., 2018; Kirovski et al., 2011).

Na opis udalostí vedúcich k NAFLD sa tradične používa takzvaná teória „dvoch úderov“. Podľa tejto
teórie je „prvý úder“ spôsobený inzulínovou rezistenciou sprostredkovanou nadmerným hromadením
lipidov v pečeni v dôsledku zvýšenej de novo lipogenézy a zmeneného transportu mastných kyselín, zatiaľ čo „druhý úder“ zodpovedá za oxidačný stres pečene, zápal a mitochondriálnu dysfunkciu. Všetky tieto udalosti by viedli k rozvoju NAFLD, ako aj k progresii do nealkoholovej steatohepatitídy (NASH) (Engin, 2017). Táto teória sa však považuje za príliš zjednodušenú, a preto bola navrhnutá teória „viacnásobného zásahu“, ktorá okrem vyššie uvedených mechanizmov považuje za jeden z prispievajúcich faktorov aj zmeny v zložení črevnej mikrobioty (Buzzetti et al., 2016). V tejto štúdii strava HFHF nielenže viedla k zníženiu mikrobiálnej α-diverzity, ako to odhalili nižšie hodnoty indexu Chao1, ale ovplyvnila aj abundanciu špecifických črevných baktérií. Podobné výsledky boli až skôr zaznamenané u potkanov Wistar, ktoré boli 6 týždňov kŕmené stravou bohatou na tuky a sacharózu (45 % a 17 % celkovej energie vo forme tukov a sacharózy) (Etxeberria et al., 2015). Baktérie z čeľade Ruminococcaceae, o ktorých je známe, že sú nepriamo korelované s NAFLD u ľudí (Astbury et al., 2020), boli hojné v kontrolnej skupine a výrazne sa znížili u zvierat kŕmených stravou HFHF. Okrem toho sa v skupine HFHF zvýšil výskyt viacerých rodov baktérií, ktoré súvisia so zmenami v pečeni, ako napríklad Clostridium sensu stricto 1 alebo Blautia. Zaujímavé je, že k týmto zmenám došlo napriek tomu, že na úrovni triedy (Clostridia) a radu (Clostridiales) bol výskyt týchto baktérií vyšší v kontrolnej skupine. Tieto zistenia naznačujú, že negatívne účinky vyvolané stravou HFHF ovplyvňujú celkovú diverzitu črevnej mikrobioty, a tým aj výskyt špecifických baktérií. Výsledky získané v tejto štúdii týkajúce sa zloženia črevnej mikrobioty sú v súlade s výsledkami, ktoré uvádzajú iní autori používajúci modely hlodavcov kŕmených nevyváženou experimentálnou stravou (Chen et al., 2019; Daniel et al., 2014; Duparc et al., 2017; Leal-Díaz et al., 2016).
Jedným z obmedzení tejto štúdie je, že analýza zloženia črevnej mikrobioty pomocou 16S rRNA bola
vykonaná len v jednom časovom bode, a to na základe vzoriek stolice odobratých na konci štúdie. Hlavným dôvodom, prečo sa vzorky stolice nezhromažďovali v predchádzajúcich časových bodoch (na začiatku štúdie), je to, že po adaptačnom období boli zvieratá náhodne rozdelené do experimentálnych skupín za predpokladu, že medzi oboma experimentálnymi skupinami neboli žiadne rozdiely v počiatočnom stave. Ďalším obmedzením je nedostatočné rozlíšenie na úrovni druhov pri sekvenovaní amplikónov, čo umožňuje charakterizovať mikrobiálne zmeny iba na úrovni rodu, a zastúpenie menej charakterizovaných rodov, ako je UBA1819.
Okrem zloženia črevnej mikrobioty sa rôzne metabolické produkty, ktoré produkujú črevné, vzbudili záujem ako mediátory komunikácie medzi mikrobiómom a hostiteľom (Bashiardes et al., 2016).
Medzi nimi vzbudili veľkú pozornosť SCFA, pretože je známe, že tieto metabolity sa podieľajú na udržiavaní telesnej hmotnosti a energetickej homeostázy alebo metabolizmu glukózy a lipidov, ako aj na vývoji NAFLD (Bashiardes et al., 2016). V tomto ohľade môžu SCFA chrániť pred NAFLD, zlepšovať integritu črevnej bariéry, znižovať akumuláciu viscerálneho tukového tkaniva a nadmerný vstup mastných kyselín do pečene, ako aj priamo pôsobiť protizápalovo, keď sa dostanú do pečene (Dai et al., 2020).
Acetát, propionát a butyrát sú tri hlavné prchavé SCFA produkované črevnými baktériami a je známe, že
sa podieľajú na rôznych procesoch (Deleu et al., 2021). V prípade pečene štúdie vykonané na hlodavcoch a ľuďoch opisujú hepatoprotektívne účinky týchto SCFA. K dnešnému dňu bolo opísaných niekoľko
mechanizmov účinku SCFA na ochranu pečene (Dangana et al., 2020), vrátane modulácie akumulácie tuku
vo viscerálnom tukovom tkanive a metabolizmu lipidov. Okrem toho je zlepšenie funkcie črevnej bariéry
spôsobené týmito SCFA potenciálne zodpovedné za ich hepatoprotektívne účinky. Okrem toho bolo opísané, že aktivácia inflamatózneho komplexu obsahujúceho pyrínovú doménu 3 z rodiny nod-like receptorov a následné uvoľnenie interleukínu 18 produkovaného acetátom, butyrátom a propionátom tiež zlepšuje integritu črevnej bariéry (Macia et al., 2015). Napriek dobre charakterizovaným hepatoprotektívnym účinkom acetátu, propionátu a butyrátu neboli zistené žiadne rozdiely v ich hladinách medzi kontrolnou skupinou a skupinou HFHF. Pokiaľ ide o zvýšenú hladinu kyseliny izomaslovej v stolici zistenú v skupine HFHF v našej štúdii, mohlo by sa to považovať za očakávané, pretože zvýšená hladina tohto bakteriálneho produktu v stolici bola zistená u pacientov s NAFLD (Da Silva et al., 2018; Jumpertz et al., 2011). Okrem toho bola zaznamenaná vyššia hladina kyseliny izomaslovej v stolici.

Vzorky subjektov s hypercholesterolémiou v štúdii, o ktorej informovali Granado-Serrano et al. (2019), kde
bola pozorovaná pozitívna korelácia medzi hladinou izomaslovej kyseliny v stolici a hladinou cholesterolu v sére v lipoproteínoch s nízkou hustotou. Okrem toho sa v tejto štúdii zistila aj vyššia koncentrácia kyseliny izovaleriánovej v stolici u pacientov s hypercholesterolémiou, čo dobre zodpovedá výsledkom našej štúdie, kde potkany kŕmené stravou HFHF vykazovali rovnaký účinok (Granado-Serrano et al., 2019). V našom prípade však nebola zistená žiadna korelácia medzi hladinou tejto SCFA a hladinami non-HDL-c. Pokiaľ ide o kyselinu valérovú, štúdie zaoberajúce sa účinkami tejto SCFA na steatózu pečene sú vzácne.
S cieľom lepšie pochopiť potenciálne súvislosti medzi skúmanými mikrobiálnymi meraniami a
fenotypickými, biochemickými a SCFA hladinami boli vykonané korelačné štúdie. Podľa získaných výsledkov by baktérie z čeľade Ruminococcaceae mohli byť považované za markery nízkej hmotnosti pečene a/alebo hladín sérových transamináz a non-HDL-c, keďže v kontrolnej skupine boli zistené negatívne korelácie medzi týmito baktériami a uvedenými markermi. Tieto výsledky možno vysvetliť tým, že tieto baktérie súvisia so zdravím gastrointestinálneho traktu u ľudí vďaka ich vplyvu na udržanie štruktúry a funkcií čriev, ako je priepustnosť, vstrebávanie živín a imunokompetencia (Rajilić-Stojanović a de Vos, 2014; Tang et al., 2018). Pokiaľ ide o pozitívne korelácie zistené v skupine HFHF medzi Clostridium sensu stricto 1 a Clostridiaceae 1 s parametrami, ako sú non-HDL-c a GPx, tieto výsledky sú v súlade s údajmi uvedenými v štúdiách na ľuďoch, v ktorých bola hojnosť týchto baktérií pozitívne korelovaná s priemerom molekuly HDL-c (Vojinovic et al., 2019). Iné štúdie však uvádzajú aj negatívne korelácie týchto baktérií s markermi, ako je meranie tuhosti pečene a kontrolovaný parameter atenuácie u ľudí (Lanthier et al., 2021). Zníženie hojnosti bolo skutočne spojené s rozvojom fibrózy pečene u pacientov s ťažkou steatózou (Lanthier et al., 2021). Preto napriek tomu, že Clostridium sensu stricto 1 a Clostridiaceae 1 sú indikátormi menej zdravej mikrobioty (Yang et al., 2019), sú potrebné ďalšie štúdie, aby sa lepšie pochopila táto zjavná nezrovnalosť. Pokiaľ ide o SCFA, napriek tomu, že medzi kontrolnou skupinou a skupinou s HFHF boli zistené významné rozdiely v ich hladinách, nebola zistená žiadna korelácia so zložením črevnej mikrobioty. Tieto výsledky môžu byť neočakávané, najmä v prípade potkanov v kontrolnej skupine, ktorých výkaly vykazovali väčší výskyt baktérií produkujúcich butyrát, ako sú Ruminococcaceae, ale bez skutočnej zmeny hladín butyrátu. Podobne sa dalo očakávať zvýšenie hladín acetátu u zvierat kŕmených stravou HFHF, keďže bola navrhnutá súvislosť medzi týmto SCFA a metabolickým syndrómom prostredníctvom osi mikrobiota-mozog (Perry et al., 2016). V tomto scenári by
sa dalo predpokladať, že pozorované zmeny v zložení črevnej mikrobioty neboli dostatočne veľké na to, aby ovplyvnili produkciu určitých SCFA. V tomto ohľade by dlhšie experimentálne obdobie mohlo viesť k
jasnejšiemu vzťahu medzi zmenami v zložení črevnej mikrobioty a hladinami SCFA.
Záverom, súčasná štúdia dokazuje, že zmeny vyvolané stravou bohatou na vysokú energiu
v nasýtených tukoch a fruktóze v pečeni, ako aj zhoršenie viacerých metabolických markerov podieľajúcich sa na glykemickej kontrole a lipidovej homeostáze, môže súvisieť, aspoň čiastočne so zmenami v celkovom zložení črevnej mikrobioty a množstvom špecifických baktérií odvodených od tohto stravovacieho vzorca, keďže bolo charakterizovaných niekoľko mechanizmov pôsobenia (zvýšená priepustnosť čriev, zvýšená translokácia baktérií a produkcia/uvoľňovanie prozápalových mediátorov alebo zápal tukového tkaniva a pečene), ktoré spájajú tieto dve udalosti (Deleu et al., 2021). Na lepšie objasnenie/potvrdenie tejto hypotézy sú však potrebné ďalšie výskumy. Pokiaľ ide o SCFA, rozdiely zistené medzi experimentálnymi skupinami neboli rozsiahle napriek významným zmenám vyvolaným stravou HFHF v bohatstve a diverzite črevnej mikrobioty. Zdá sa, že za týchto experimentálnych podmienok je úloha SCFA v rozvoji steatohepatitídy vyvolanej stravou obmedzená a nemusí súvisieť so zmenami črevnej mikrobioty.

Poďakovanie. Analýzy SCFA boli vykonané pomocou zariadení Centra pre omické vedy (COS), spoločného pracoviska Univerzity Rovira i Virgili a Eurecat. Doplnkové materiály. Doplnkové materiály k tomuto článku nájdete na stránke http://doi.org/10.1017/gmb.2022.2.
Vyhlásenie o zverejnení. Autori vyhlasujú, že nemajú žiadny konflikt záujmov

Príspevky autorov. Koncepcia: M.P.P., J.A.M. a I.M.-L.; Správa údajov: I.M.-L., L.J.M.-Z., S.G.-Z., E.C.S.P. a
A.F.-Q.; Formálna analýza: I.M.-L., L.J.M.-Z. a E.C.S.P.; Získavanie finančných prostriedkov: M.P.P.; Vyšetrovanie: M.P.P., J.A.M., I.M.-L.,L.J.M.-Z., S.G.-Z. a A.F.-Q.; Metodika: I.M.-L., S.G.-Z. a M.P.P.; Písanie – pôvodný návrh: M.P.P., J.A.M. a I.M.-L; Písanie – revízia a editácia: I.M.-L., L.J.M.-Z., S.G.-Z., E.C.S.P., A.F.-Q., M.P.P. a J.A.M.
Financovanie. I.M.-L. ďakuje za finančnú podporu programu Juan de la Cierva – štipendiá na vzdelávanie Španielskej štátnej výskumnej agentúry španielskeho ministerstva vedy a inovácií a ministerstva univerzít (FJC2019-038925-I). L.J.M. Z. je držiteľom grantu Juan de la Cierva (IJC2019-042188-I) od španielskej štátnej výskumnej agentúry Ministerio de Ciencia e Innovación y Ministerio de Universidades. Tento výskum bol financovaný Ministerstvom hospodárstva a konkurencieschopnosti – Európskym fondom regionálneho rozvoja (grant číslo AGL-2015-65719-R MINECO/FEDER, EÚ), Instituto de Salud Carlos III CIBERobn (grantové číslo CB12/03/30007) a Univerzita Baskicka (grantové číslo GIU 18/173).

Referencie
Aebi H (1984) Kataláza in vitro. Metódy v enzymológii 105, 121–126.
Alves-Bezerra M a Cohen DE (2017) Metabolizmus triglyceridov v pečeni. Komplexná fyziológia 8(1), 1–8.
Aragonès G, González-García S, Aguilar C, Richart C, Auguet T (2019) Mediátory pochádzajúce z črevnej mikrobioty ako potenciálne markery pri nealkoholovom steatóze pečene. BioMed Research International 2019, 8507583. https://doi.org/10.1155/2019/ 8507583
Astbury S, Atallah E, Vijay A, Aithal GP, Grove JI a Valdes AM (2020) Nižšia diverzita mikrobiómu čreva a vyššia abundancia prozápalového rodu Collinsella sú spojené s biopsicky potvrdenou nealkoholovou steatohepatitídou. Gut Microbes 11(3), 569580.
Bashiardes S, Shapiro H, Rozin S, Shibolet O, Elinav E (2016) Nealkoholové mastné pečene a črevná mikrobiota. Molecular Metabolism 5(9),782–794.
Blüher M (2019) Obezita: Globálna epidemiológia a patogenéza. Nature Reviews. Endocrinology 15, 288–298.
Bolyen E, Rideout JR, Dillon MR, Bokulich NA, Abnet CC, Al-Ghalith GA, Alexander H, Alm EJ, Arumugam M, Asnicar F, Bai Y, Bisanz JE, Bittinger K, Brejnrod A, Brislawn CJ, Brown CT, Callahan BJ, Caraballo-Rodríguez AM, Chase J, Cope EK, Da Silva R, Diener C, Dorrestein PC, Douglas GM, Durall DM, Duvallet C, Edwardson CF, Ernst M, Estaki M, Fouquier J, Gauglitz JM, Gibbons SM, Gibson DL, Gonzalez A, Gorlick K, Guo J, Hillmann B, Holmes S, Holste H, Huttenhower C, Huttley GA, Janssen S, Jarmusch AK, Jiang L, Kaehler BD, Kang KB, Keefe CR, Keim P, Kelley ST, Knights D, Koester I, Kosciolek T, Kreps J, Langille MGI, Lee J, Ley R, Liu YX, Loftfield E, Lozupone C, Maher M, Marotz C , Martin BD, McDonald D, McIver LJ, Melnik AV, Metcalf JL, Morgan SC, Morton JT, Naimey AT, Navas-Molina JA, Nothias LF, Orchanian SB,
Pearson T, Peoples SL, Petras D, Preuss ML, Pruesse E, Rasmussen LB, Rivers A, Robeson MS, Rosenthal P, Segata N, Shaffer M, Shiffer A, Sinha R, Song SJ, Spear JR, Swafford AD, Thompson LR, Torres PJ, Trinh P, Tripathi A, Turnbaugh PJ, Ul Hasan S, van der Hooft JJJ, Vargas F, Vázquez-Baeza Y, Vogtmann E, von Hippel M , Walters W, Wan Y, Wang M, Warren J, Weber KC, Williamson CHD, Willis AD, Xu ZZ, Zaneveld JR, Zhang Y, Zhu Q , Knight R a Caporaso JG (2019)

Reprodukovateľná, interaktívna, škálovateľná a rozširovateľná veda o mikrobiómových dátach pomocou QIIME 2. Nature Biotechnology 37, 852–857.
Brunt EM, Wong VW, Nobili V, Day CP, Sookoian S, Maher JJ, Bugianesi E, Sirlin CB, Neuschwander-Tetri BA a Rinella ME (2015) Nealkoholové ochorenie pečene. Nature Reviews Disease Primers 1, 15080. https://doi.org/10.1038/ nrdp.2015.80
Buzzetti E, Pinzani M a Tsochatzis EA (2016) Patogenéza nealkoholovej mastnej choroby pečene (NAFLD) s viacerými príčinami. Metabolism 65(8), 1038–1048.
Callahan BJ, McMurdie PJ, Rosen MJ, Han AW, Johnson AJA a Holmes SP (2016) DADA2: Vysokorozlíšiteľná inferencia vzorky u z údajov Illumina amplicon. Nature Methods 13(7), 581–583.
Chakraborti CK (2015) Nové zistené prepojenie medzi mikrobiómom a obezitou. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology 6 (4), 110–119.
Chen Y, Sun H, Bai Y a Zhi F (2019) Exozómy pochádzajúce z dysbiózy čriev vyvolávajú steatózu pečene tým, že prenášajú HMGB1 z čreva do pečene u myší ( ). Biochemical and Biophysical Research Communications 509(3), 767–772.
Dangana EO, Omolekulo TE, Areola ED, Olaniyi KS, Soladoye AO a Olatunji LA (2020) Acetát sodný chráni pred nadbytkom pečeňových lipidov vyvolaným nikotínom u samcov potkanov potlačením aktivity xantínoxidázy. Chemico-Biological Interactions 316, 108929.
Dai X, Hou H, Zhang W, Liu T, Li Y, Wang S, Wang B a Cao H (2020) Mikrobiálne metabolity: Kritické regulátory v NAFLD. Frontiers in Microbiology 11, 567654. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.567654
Daniel H, Gholami AM, Berry D, Desmarchelier C, Hahne H, Loh G, Mondot S, Lepage P, Rothballer M, Walker A, Böhm C, Wenning M, Wagner M, Blaut M, Schmitt-Kopplin P, Kuster B, Haller D a Clavel T (2014) Strava s vysokým obsahom tukov mení fyziológiu črevnej mikroflóry u u myší. The ISME Journal 8(2), 295–308.
Da Silva HE, Teterina A, Comelli EM, Taibi A, Arendt BM, Fischer SE, Lou W a Allard JP (2018) Nealkoholové ochorenie pečene je spojené s dysbiózou nezávislou od indexu telesnej hmotnosti a inzulínovej rezistencie. Vedecké správy 8(1), 1466. https://doi.org/10.1017/gmb.2022.2 Publikované online vydavateľstvom Cambridge University Press
Deleu S, Machiels K, Raes J, Verbeke K a Vermeire S (2021) Krátke reťazce mastných kyselín a organizmy, ktoré ich produkujú: prehliadaná terapia IBD? eBioMedicine 66, 103293.
DiStefano JK a Shaibi GQ (2021) Vzťah medzi nadmernou konzumáciou fruktózy v strave a kým ochorením pečene u detí. Pediatric Obesity 16(6), e12759. https://doi.org/10.1111/ijpo.12759
Dixon P (2003) VEGAN, balík funkcií R pre ekológiu spoločenstiev. Journal of Vegetation Science 14, 927–930.
Duparc T, Plovier H, Marrachelli VG, Van Hul M, Essaghir A, Ståhlman M, Matamoros S, Geurts L, Pardo-Tendero MM, Druart C,
Delzenne NM, Demoulin JB, van der Merwe SW, van Pelt J, Bäckhed F, Monleon D, Everard A a Cani PD ( 2017) Hepatocyt MyD88 ovplyvňuje žlčové kyseliny, črevnú mikroflóru a metabolóm, čím prispieva k regulácii metabolizmu glukózy a lipidov . Gut 66(4), 620–632.
Engin A (2017) Nealkoholové ochorenie pečene. Pokroky v experimentálnej medicíne a biológii 960, 443–467. Etxeberria U, Arias N, Boque N, Macarulla MT, Portillo MP, Martínez JA, Milagro FI (2015) Premena zloženia črevnej mikroflóry prijímaním trans-resveratrolu a kvercetínu u potkanov kŕmených stravou s vysokým obsahom tukov a sacharózy. Časopis pre výživovú biochémiu 26(6), 651–660.
Folch J, Lees M a Sloane Stanley GH (1957) Jednoduchá metóda izolácie a purifikácie celkových lipidov z živočíšnych tkanív. The Journal of Biological Chemistry 226(1), 497–509.
Glass O, Henao R, Patel K, Guy CD, Gruss HJ, Syn WK, Moylan CA, Streilein R, Hall R, Diehl AM a Abdelmalek MF (2018) Interleukín-8, osteopontín a monocytový chemoatraktantný proteín 1 v sére sú spojené s pečeňovou fibrózou u pacientov s nealkoholovým steatóznym ochorením pečene. Hepatology Communications 2(11), 1344–1355.
Gómez-Zorita S, González-Arceo M, Trepiana J, Aguirre L, Crujeiras AB, Irles E, Segues N, Bujanda L a Portillo MP (2020) Porovnávacie účinky pterostilbénu a jeho materskej zlúčeniny resveratrolu na oxidačný stres a zápal pri steatohepatitíde u potkanov vyvolanej stravou s vysokým obsahom tukov a fruktózy. Antioxidants (Basel) 9(11), 1042. https://doi.org/10.3390/antiox9111042
Granado-Serrano AB, Martín-Garí M, Sánchez V, Riart Solans M, Berdún R, Ludwig IA, Rubió L, Vilaprinyó E, Portero- Otín M a Serrano JCE (2019) Charakteristické znaky fekálnych baktérií a mastných kyselín s krátkym reťazcom pri hypercholesterolémii. Vedecké správy 9, 1772. https://doi.org/10.1038/s41598-019-38874-3
Hannou SA, Haslam DE, Mckeown NM a Herman MA (2018) Metabolizmus fruktózy a metabolické ochorenia. The Journal of Clinical Investigation 128(2), 545–555.
Hwalla N a Jaafar Z (2021) Diétna liečba obezity: Prehľad dôkazov. Diagnostics (Basel) 11(1), 24.
Jegatheesan P, Beutheu S, Ventura G, Sarfati G, Nubret E, Kapel N, Waligora-Dupriet AJ, Bergheim I, Cynober L a De Bandt JP (2016) Vplyv špecifických aminokyselín na metabolizmus lipidov v pečeni pri nealkoholovom steatóznom ochorení pečene vyvolanom fruktózou. Clinical Nutrition 35(1), 175–182.
Jegatheesan P a De Bandt JP (2017) Fruktóza a NAFLD: Mnohostranné aspekty metabolizmu fruktózy. Nutrients 9(3), 230.
Jumpertz R, Le DS TPJ, Trinidad C, Bogardus C, Gordon JI a Krakoff J (2011) Štúdie energetickej rovnováhy odhaľujú súvislosti medzi črevnými mikróbmi, kalorickým príjmom a vstrebávaním živín u ľudí. The American Journal of Clinical Nutrition 94(1), 58–65.
Kirovski G, Dorn C, Huber H, Moleda L, Niessen C, Wobser H, Schacherer D, Buechler C, Wiest R a Hellerbrand C (2011) Zvýšená hladina systémového chemotaktického proteínu monocytov-1 pri steatóze pečene bez výrazného zápalu pečene. Experimentálna a molekulárna patológia 91(3), 780–783.
Lanthier N, Rodriguez J, Nachit M, Hiel S, Trefois P, Neyrinck AM, Cani PD, Bindels LB, Thissen JP a Delzenne NM (2021) Oprava vydavateľa: Analýza mikrobioty a prechodná elastografia odhaľujú nové extrahepatálne zložky steatózy a fibrózy pečene u obéznych pacientov. Vedecké správy 11(1), 6123. https://doi.org/10.1038/s41598-021-85083-y
Leal-Díaz AM, Noriega LG, Torre-Villalvazo I, Torres N, Alemán-Escondrillas G, López-Romero P, Sánchez-Tapia M, Aguilar
López M, Furuzawa-Carballeda J, Velázquez-Villegas LA, Avila-Nava A, Ordáz G, Gutiérrez-Uribe JA, Serna- Saldivar SO a Tovar AR (2016) Koncentrát Aguamiel z Agave salmiana a jeho extrahované saponíny zmiernili obezitu a steatózu pečene a zvýšili Akkermansia muciniphila u myší C57BL6. Vedecké správy 6, 34242. https://doi.org/ 10.1038/srep34242
Lian CY, Zhai ZZ, Li ZF a Wang L (2020) Nealkoholové ochorenie pečene vyvolané stravou s vysokým obsahom tukov: Prehľad navrhovaných mechanizmov. Chemico-Biological Interactions 330, 109199. https://doi.org/10.1016/j.cbi.2020.109199
Macia L, Tan J, Vieira AT, Leach K, Stanley D, Luong S, Maruya M, McKenzie CI, Hijikata A, Wong C, Binge L, Thorburn AN,
Chevalier N, Ang C, Marino E, Robert R, Offermanns S, Teixeira MM, Moore RJ, Flavell RA, Fagarasan S a Mackay CR (2015) Receptory GPR43 a GPR109A citlivé na metabolity uľahčujú homeostázu čreva vyvolanú vlákninou v strave prostredníctvom regulácie inflamatózneho komplexu. Nature Communications 6, 6734.
Masarone M, Federico A, Abenavoli L, Loguercio C a Persico M (2014) Nealkoholové mastné pečene: epidemiológia a prirodzený vývoj. Recenzie nedávnych klinických štúdií 9(3), 126–133.
McMurdie PJ a Holmes S (2013) Phyloseq: Balík R pre reprodukovateľnú interaktívnu analýzu a grafiku údajov zo sčítania mikrobiómu. PLoS One 8(4), e61217. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061217
https://doi.org/10.1017/gmb.2022.2
I. Milton-Laskibar a kol. Milton-Laskibar I, Marcos-Zambrano LJ, Gómez-Zorita S, Fernández-Quintela A, Carrillo de Santa Pau E, Martínez JA a Portillo MP (2021) Črevná mikrobiota indukovaná pterostilbenom a resveratrolom u potkanov kŕmených stravou s vysokým obsahom tukov a fruktózy: Predpokladaná úloha mikrobiómu ( ) pri vzniku steatohepatitídy. Nutrients 13(5), 1738. https://doi.org/10.3390/nu13051738
Perry RJ, Peng L, Barry NA, Cline GW, Zhang D, Cardone RL, Petersen KF, Kibbey RG, Goodman AL a Shulman GI (2016) Acetát sprostredkováva os mikrobióm-mozog-β-bunky, čím podporuje metabolický syndróm. Nature 534(7606), 213–217.
Quast C, Pruesse E, Yilmaz P, Gerken J, Schweer T, Yarza P, Peplies J a Glöckner FO (2013) Projekt databázy génov SILVA ribozomálnej RNA : Vylepšené spracovanie údajov a webové nástroje. Nucleic Acids Research 41, D590–D596.
Rajilić-Stojanović M a de Vos WM (2014) Prvých 1000 kultivovaných druhov mikrobioty ľudského gastrointestinálneho traktu. FEMS Microbiology Reviews 38(5), 996–1047.
Sattar N, Forrest E a Preiss D (2014) Nealkoholové ochorenie pečene. BMJ 349, g4596. https://doi.org/10.1136/bmj.g4596 Segata
N, Izard J, Waldron L, Gevers D, Miropolsky L, Garrett WS a Huttenhower C (2011) Objav a vysvetlenie metagenomického biomarkera https://doi.org/10.1186/gb-2011-12-6-r60
Silveira EA, Kliemann N, Noll M, Sarrafzadegan N a de Oliveira C (2021) Visceral obesity and incident cancer and cardiovascular disease: An integrative review of the epidemiological evidence. Obesity Reviews 22(1), e13088.
Softic S, Cohen DE a Kahn CR (2016) Úloha fruktózy v strave a de novo lipogenézy v pečeni pri ochoreniach pečene. Digestive Diseases and Sciences 61(5), 1282–1293.
Softic S, Meyer JG, Wang GX, Gupta MK, Batista TM, Lauritzen HPMM, Fujisaka S, Serra D, Herrero L, Willoughby J, Fitzgerald
K, Ilkayeva O, Newgard CB, Gibson BW, Schilling B, Cohen DE a Kahn CR (2019) Cukry v strave menia oxidáciu mastných kyselín v pečeni prostredníctvom transkripčných a posttranslačných modifikácií mitochondriálnych proteínov. Cell Metabolism 30(4), 735–753.
Softic S, Stanhope KL, Boucher J, Divanovic S, Lanaspa, MA, Johnson, RJ a Kahn CR (2020) Fruktóza a rezistencia pečene na inzulínový . Kritické recenzie v klinických laboratórnych vedách 57(5), 308–322.
Sta n h ope KL, Medici V, Bremer AA, Lee V, Lam HD, Nunez MV, Chen GX, Keim NL a Havel PJ (2015) Štúdia dávkovo odozvovej reakcie konzumácie nápojov sladených kukuričným sirupom s vysokým obsahom fruktózy na rizikové faktory lipidov/lipoproteínov pre kardiovaskulárne ochorenia u mladých dospelých. The American Journal of Clinical Nutrition 101(6), 1144–1154.
Tang W, Yao X, Xia F, Yang M, Chen Z, Zhou B a Liu Q (2018) Modulácia črevnej mikroflóry u potkanov tabletami Hugan Qingzhi počas liečby nealkoholického steatózneho ochorenia pečene vyvolaného stravou s vysokým obsahom tukov. Oxidatívna medicína a bunková dlhovekosť 2018, 7261619. https://doi.org/10.1155/2018/7261619 Vojinovic D, Radjabzadeh D, Kurilshikov A, Amin N, Wijmenga C, Franke L, Ikram MA, Uitterlinden AG, Zhernakova A, Fu J, Kraaij R a van Duijn CM (2019) Vzťah medzi črevnou mikrobiotou a cirkulujúcimi metabolitmi v populáciách založených na kohortách . Nature Communications 10(1), 5813.
Wang H, Sun RQ, Zeng XY, Zhou X, Li S, Jo E, Molero JC a Ye JM (2015) Obnovenie autofágie zmierňuje stres endoplazmatického retikula v pečeni a narušenú transdukciu inzulínového signálu u samcov myší kŕmených stravou s vysokým obsahom fruktózy. Endocrinology 156(1), 169–181.
WHO (2020) Obezita a nadváha. 6. jún 2021 Dostupné na https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/obesity- and overweight.
World Obesity (2021) Prevalence obezity. Dostupné na https://www.worldobesity.org/about/about-obesity/prevalence-of- obesity Yang WY, Lee Y, Lu H, Chou CH a Wang C (2019) Analýza črevnej mikrobioty a účinku kyseliny laurovej proti nekrotickej enteritíde spôsobenou om v modeli súbežnej infekcie Clostridium perfringens a Eimeria. PLoS One 14(5), e0205784.
Zeng M a Cao H (2018) Rýchla kvantifikácia mastných kyselín s krátkym reťazcom a ketónových teliesok pomocou kvapalinovej chromatografie a tandemovej hmotnostnej spektrometrie po jednoduchom derivovaní spojenej s extrakciou kvapalina kvapalina. Journal of Chromatography B 1083, 137–145.

© Autori, 2022. Publikované Cambridge University Press v mene The Nutrition Society. Ide o článok s otvoreným prístupom, distribuovaný podľa
podmienok licencie Creative Commons Attribution (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), ktorá umožňuje neobmedzené opätovné použitie, distribúciu a reprodukciu v akomkoľvek médiu za podmienky, že je správne citované pôvodné dielo.